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Fluoxetina y Acupuntura.

Fluoxetina y Acupuntura.

Comparativa entre dos técnicas.

MENOS MEDICACIÓN Y MAS ACUPUNTURA.

Basado en el Paper: Mechanisms Underlying the Antidepressant Response of Acupunture via PKA/CREB signaling Pathway. Acupuntura y depresión.

Traducido y desarrollado por el Profesor Moltó Ripoll.

La acupuntura científica es la especialidad de la Medicina Tradicional China que se enfoca en la demostración y explicación de los fenómenos que la tradición describe con metáforas antiguas. Sin bien, estas metáforas sirven como modelo pragmático de actuación no se entienden bien bajo el método de la ciencia actual, creando lamentablemente a veces movimientos escépticos en contra de nuestra ciencia, por desconocimiento de esta especialización.

Desde mi punto de vista, la sabiduría tradicional durante miles de años ha ido describiendo profundamente los efecto de la acupuntura, sin embargo a la hora de las explicaciones a utilizado un modelo bioenergético que difícilmente se puede adaptar al método científico, tachado de pseudociencia. Sin embargo, hoy sabemos que existen modelos explicativos biológicos y físicos que apoyan las descripciones metafóricas de la Medicina Tradicional. Siempre sin faltarle el respeto a esta última, sino más bien enriqueciéndola y llevándola a la vanguardia de nuestros tiempo. Esa es mi humilde misión en mi profesión actual como divulgador científico de la Medicina Oriental y mis trabajos en el desarrollo de la PsicoNeuroAcupuntura.

El presente trabajo esta basado en el paper del equipo del School of Acupuncture-Moxibustion and Tuina, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing. Los autores los cito a continuación. Este trabajo nos sirve como modelo de integración entre la tradición y la ciencia actual.

Hoy sabemos que los mecanismos moleculares asociados con la respuesta antidepresiva de la acupuntura, la neurogénesis y los comportamientos de tipo depresivo mejoran con los tratamientos llevados a cabo con la acupuntura, sin embargo los mecanismos subyacentes a estas mejoras permanecen sin explorar. En lo que se refiere a la acupuntura científica. El lector tiene que entender que este trabajo se alinea en la dirección de la justificación científica de nuestra especialidad. Es necesario dejar esto claro, pues no hablamos de los mecanismos tradicionales que son de sobra conocidos.

En este trabajo me centro en el articulo publicado en el Hindawi, Neuroal Plasticity. Vol 2, 2017. Art ID. 4135164, 11pages[i]. Por los autores: Huili Jiang,1 Xuhui Zhang,1 Yu Wang,1 Huimin Zhang,2 Jing Li,1 Xinjing Yang,1
Bingcong Zhao,1 Chuntao Zhang,3 Miao Yu,1 Mingmin Xu,1 Qiuyun Yu,1 Xingchen Liang,1 Xiang Li,1 Peng Shi,1 and Tuya Bao1

1School of Acupuncture-Moxibustion and Tuina, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029, China 2Department of Traditional Chinese Medicine, Beijing United Family Rehabilitation Hospital, Beijing 100016, China 3School of Acupuncture-Moxibustion and Tuina, Shaanxi University of Chinese Medicine, Xianyang 712046, China.

El Paper se titula: Mechanisms Underlying the Antidepressant Response of Acupunture via PKA/CREB signaling Pathway.

El objetivo fue identificar los mecanismos subyacentes a la respuesta antidepresiva de la acupuntura a través de la vía de señalización PKA en ratas con depresión mediante el uso de la vía de señalización PKA con el inhibidor H89 en experimentos in vivo[1].

En conclusión: nuestros resultados apoyan la hipótesis de que la acupuntura podría mejorar los comportamientos de tipo depresivo mediante la regulación PKA/CREB vía señalización, que podría ser mediada principalmente por la regulación de la fosforilación a nivel de CREB.

  1. Introducción:

    Inmunología y Psiconeuroacupuntura

    Acupuntura cientifica, el libro científico de la Inmunología en Acupuntura

El trastorno depresivo es un trastorno mental común que ha estado afectando a millones de personas en todo el mundo [1]. Los principales síntomas del trastorno depresivo se caracterizan por trastornos del estado de ánimo, anhedonia, disfunción cognitiva o mayor vulnerabilidad a la recaída [2]. Se ha investigado que los factores estresantes son los factores precipitantes más prevalentes para el desarrollo, mantenimiento o exacerbación del trastorno depresivo. Hay pruebas suficientes de que los factores estresantes están estrechamente asociados con la alteración de la neurogénesis y la plasticidad estructural en el hipocampus [3-4]. Además, se han realizado estudios que indican que los cambios morfológicos, alteración de la neurogesis, la estructura plasmática dañada, o incluso la apoptosis en el hipocampo se detectaron en el trastorno depresivo [5-9].

En la actualidad, los fármacos antidepresivos (por ejemplo, paroxetina, fluoxetina) son el tratamiento principal para la depresión y han sido ampliamente utilizados para el tratamiento de la depresión en la clínica. Fluoxetina, uno de los fármacos antidepresivos caracterizados por un inhibidor selectivo de la recaptación de serotonina (5-hidroxitriptamina (5-HT)), ha sido aprobado por la Food and Drug Administration (FDA) para tratar trastornos relacionados con el estrés Depresión y ansiedad) en los pacientes [10].

Los fármacos antidepresivos están de hecho disponibles en la actualidad. Sin embargo, se ha demostrado que aproximadamente un tercio los pacientes con trastorno depresivo no responden a las terapias antidepresivas convencionales [11].

Mientras tanto, los datos de las investigaciones clínicas y trabajos con los animales de laboratorio han proporcionado pruebas convincentes de que algunos fármacos antidepresivos tienen efectos ansiogénicos durante la fase aguda del tratamiento o incluso agravan el pensamiento y el comportamiento suicidas [10-12-13]. En consecuencia, existe una necesidad urgente de investigar nuevos marcos conceptuales para comprender la patogénesis de la depresión y explorar mejores tratamientos para la depresión.

Todavía se desconocen los factores y mecanismos precisos que contribuyen a la depresión. La patogénesis precisa y la etiología de la depresión ha sido un tema difícil[2]. En la actualidad, la participación de alteraciones en la respuesta inmune y la respuesta inflamatoria en la fisiopatología de la depresión y el estrés ha sido evidenciada por varios estudios[3] [14-16].

Numerosos estudios han informado de que la Proteína quinasa A dependiente de AMPc-quinasa (PKA-) CREB, está involucrada en la patogénesis de la depresión. (Cuadro 1)  Se ha demostrado que la proteína de unión al elemento de respuesta de AMPc (CREB) es uno de los factores de transcripción mejor estudiados implicados en la depresión y en el proceso de tipo antidepresivo. Los datos en los seres humanos y los experimentos de laboratorio han proporcionado pruebas convincentes de que la PKA/CREB está involucrada en el efecto sobre la regulación de la plasticidad sináptica y la memoria de aprendizaje [17-22][4]. Las alteraciones sistémicas de la vía de la señal PKA/CREB podrían inducir reacciones en cascada en la neuropatología de la depresión, incluyendo anormalidades en la actividad cerebral, alteraciones en la función sináptica y presentando una neurogénesis alterada. La expresión descontrolada de los niveles de CREB han sido investigadas en el hipocampo post-mortem de los pacientes que sufrieron de depresión [23].

La señalización del CREB se ha considerado un factor crucial implicado en la promoción de la sinapsis y la plasticidad neuronal mediante la regulación de los genes que aumentan la sinapsis y la plasticidad neural, incluyendo BDNF [24]. PKA, el activador de los procesos CREB, se ha evidenciado para exhibir efecto antidepresivo por regulación positiva CREB o p-CREB [25-26].

Durante nuestros estudios anteriores, nos hemos centrado en investigar los efectos clínicos y los mecanismos de la acupuntura en la depresión. Se encontraron anomalías en distintas zonas de la actividad cerebral [27-28]. Por otra parte, los datos en animales de laboratorio que apoyan la participación de PKA/CREB en la patogénesis de la depresión, estos estudios son convincentes e incluyen hallazgos que verifican la respuesta antidepresiva de la acupuntura mediante la regulación de PKA/CREB [29-30]. Sin embargo, los mecanismos subyacentes a la respuesta antidepresiva de la acupuntura a través de PKA/CREB no se han investigado en profundidad.

En este trabajo, establecimos un modelo de rata de depresión inducida por CUMS y se evaluó la diferencia en el efecto antidepresivo entre la acupuntura y la fluoxetina. Es importante destacar, que se uso el H89, que como sabemos es un factor moderado inhibidor especifico de PKA [31-32], se empleó en el presente estudio para investigar el papel de CREB o p-CREB, activado por PKA. Se evaluaron las expresiones de PKA-α, CREB y p-CREB. Nuestro objetivo fue elucidar los mecanismos moleculares subyacentes a la respuesta antidepresiva de la acupuntura y arrojar nueva luz sobre los marcos conceptuales de las perspectivas de nuevas terapias en el tratamiento de la depresión.

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  1. MATERIAL Y METODOS:

1.Animales Experimentales y Agrupamiento.

Se obtuvieron ratas Sprague-Dawley (SD) adultas de 6 semanas de edad, que pesaban 220 ± 20 g, de centro Weitong Lihua Experimental Animal Center de Beijing, China. Las ratas se alojaron en una habitación tranquila con un ambiente controlado de 23 ° C-26 ° C y 50% ± 10% de humedad. Las ratas sometidas a CUMS se alojaron separadamente en diferentes jaulas para aislamiento social, y 5 ratas se alojaron otra jaula para grupo de control. Todos los procedimientos experimentales estaban en plena observancia del Comité de Bioética del Instituto del Comité de Cuidado de Animales, Universidad de Beijing de Medicina China, Beijing, China (permiso nº Kj-dw-32-20150612).

Se investigaron el peso corporal (BW), la prueba de preferencia de sacarosa (SPT) y la prueba de campo abierto (OFT) para garantizar la consistencia de las características basales antes de realizar el procedimiento experimental. Se excluyeron cinco ratas debido a las características basales incoherentes. A continuación, se asignaron un total de 60 ratas bajo características similares de BW, SPT y OFT en el modelo de control,  modelo + acupuntura (Acu), modelo + fluoxetina (FLX), modelo + acupuntura + H89) y los grupos modelo + fluoxetina + H89 (FLX + H89) al azar, con 10 ratas en cada grupo. Todas las ratas fueron expuestas a aislamiento social y CUMS durante 21 días excluyendo las ratas en el grupo de control. Treinta minutos antes del procedimiento CUMS, las ratas en el grupo Acu fueron acupunturadas en Baihui (GV 20) y Yintang (EX-HN 3); Las ratas del grupo FLX se administraron con fluoxetina (0,18 mg / ml) por sonda (1 ml/100 g). Se administraron inyecciones intracerebroventriculares del inhibidor H89 de la vía de señalización de la PKA (10 μM, 5 μl) en los grupos Acu + H89 y FLX + H89, 60 minutos antes del procedimiento CUMS, una vez cada dos días y luego se estimularon la acupuntura y la administración intragástrica de fluoxetina (Figura 1).

2.El estrés leve impredecible crónico (CUMS). Un modelo de trastorno depresivo inducido por CUMS en ratas se estableció en este estudio como se describe anteriormente [29-33]. Además, se hicieron algunos ajustes para añadir la imprevisibilidad. Las ratas fueron expuestas a CUMS durante 21 días, incluyendo acceso restringido a la privación de alimento durante 24 h, privación de agua durante 24 h, alojamiento en jaula húmeda durante 24 h (conteniendo 100 g de aserrín en 200 ml de agua) Iluminación durante 12 h, (restricción en una red de alambre en forma de cilindro, 20 cm de longitud y 5 cm de diámetro), agitación una vez por segundo durante 30 min y cola de clip para 3 Min (1 cm de distancia de la cola). Las ratas fueron sometidas a uno de estos 7 estímulos al azar por día, y el mismo factor de estrés no se empleó en días consecutivos para evitar la predicción de la rata. Cada factor de estrés se utilizó 3 veces al azar (Tabla 1]. Las ratas en el grupo de control se alimentaron normalmente durante 21 días con alimentos y agua ad libitum sin ningún estímulo.

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3.Procedimientos quirúrgicos para el cateterismo intracerebroventricular (ICV). Las ratas de los grupos Acu + H89 y FLX + H89 se sometieron a procedimientos quirúrgicos para las cánulas intracerebroventriculares (ICV) implantadas 7 días antes El diseño experimental como se describe en estudios anteriores [34-35]. Las ratas se anestesiaron con hidrato de cloral al 10% (0,35 ml / 100 g, i.p.) y luego se colocaron en un aparato estereotáctico (catálogo nº 68001, RuiWoDe Life Science Co., Ltd., Shenzhen, China). Las posiciones fijas fueron (coordenadas: -0,8 mm del bregma, ± 1,5 mm lateral de la sutura sagital, y -1,9 mm de profundidad de la duramadre) referido al atlas del estudio anterior [36-37]. Las cánulas ICV (ODv 0,56 x ID 0,38 mm / M 3,5, RuiWoDe Life Science Co., Ltd., Shenzhen, China) se insertaron bilateralmente en el ventrículo. Tras la detección y confirmación de la salida de líquido cefalorraquídeo de las cánulas de ICV, la cánula de guía se aseguró con tornillos y cemento dental y se cerró con una cánula falsa. Entonces, todas las ratas fueron enviadas a una habitación relativamente caliente para una mejor recuperación durante 7 días desde la cirugía, para que se acostumbraran a los procedimientos de experimentación adicional.

4.Inyección intracerebroventricular del inhibidor de la PKA H89.

En los experimentos de microinfección, las cánulas ICV fueron estrictamente desinfectadas con alcohol al 75%. Las sondas de microinflusión se introdujeron suavemente a través de las cánulas guía. La solución del inhibidor de la PKA H89 (disuelto con una solución de cloruro de sodio al 0,9%, 10 μM), 5 μl, se infundió bilateralmente en el encefalocele a una velocidad de 0,25 μl / min durante 2 minutos, una vez cada dos días. A continuación, las sondas de infusión se dejaron en su lugar durante 2 minutos adicionales para permitir que las soluciones se difundieran lejos de las puntas de la sonda. Después de una nueva desinfección con alcohol al 75%, se cerraron las cánulas ICV con una cánula falsa.

5.Estimulación con la acupuntura.

Para los animales que recibieron estimulación de acupuntura, la acupuntura comenzó 30 minutos antes del procedimiento CUMS, 10 minutos por sesión y 1 sesión diaria durante 21 días. Después de la desinfección de los sitios de acupuntura con un 75% de alcohol, las agujas de acupuntura (0,3 mm de diámetro y 25 mm de largo) se insertaron transversalmente (manteniendo el ángulo entre Aguja y la superficie de la piel a 15 °) en Baihui (GV 20) y Yintang (EX-HN 3) (coordenadas del punto de acupuntura [38]: GV 20, localizado en el bregma o en la unión de sutura coronal y sutura sagital; HN 3: a mitad de camino entre los extremos mediales de las dos cejas) a una profundidad de 5 mm como se describe en nuestro estudio anterior [29]. Cuando se realizó el procedimiento de acupuntura, las ratas se colocaron en una habitación separada y bajo las condiciones de actividades libres.

6.ICV Evaluación del Cateterismo. Para verificar la eficacia y la validez de la inyección de H89 de ICV en ratas en los grupos Acu + H89 y FLX + H89, se sometieron otras 6 ratas a cateterización ICV e inyección ICV de 1% de azul Evans. En pocas palabras, las ratas que recibieron infusiones de postraining de solución de cloruro de sodio al 0,9% después de un cateterización con ICV exitosa fueron devueltas a la jaula de retención para una mejor recuperación durante 7 días de la cirugía. A continuación, se inyectó 0,1% de azul Evans (disuelto con agua desionizada, 5 μl) en el ventrículo lateral. Después de haber sido expuestas a la actividad libre durante 4h, las ratas se anestesiaron profundamente con hidrato de cloral al 10% (0,35 ml / 100 g, ip) y luego se perfundieron intracardialmente con 100 ml de una solución de cloruro de sodio al 0,9% seguido de 200 ml de paraformaldehído al 4% 0,1 M de solución salina tamponada con fosfato (PBS). A continuación, se decapitaron las ratas y se retiraron los cerebros, se colocaron en paraformaldehído al 4% en PBS 0,1 M durante 72 h a 4ºC. Los cerebros se transfirieron a soluciones de sacarosa al 20% y al 30% para deshidratación a 4ºC. La morfología de la ventrícula lateral se detectó y se visualizó bajo un microscopio confocal de exploración láser (FV1000, Olympus, Japón) a través de secciones congeladas (8 μm) (CM-1950, Leica, alemán).

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7.Observación del comportamiento de la rata.

Todas las pruebas de comportamiento se llevaron a cabo bajo circunstancias relativamente silenciosas y oscuras. Se investigó el peso corporal (BW), la prueba de preferencia de sacarosa (SPT) y la prueba de campo abierto (OFT) al menos 12 horas después de la estimulación del estrés al final del período experimental. Se observaron estados de humor, calidad de las heces y apetito de las ratas.

7.1. Peso Corporal (BW). Los cambios en el aumento de peso corporal en comparación con la línea de base se calcularon para evaluar los estados de preferencia alimentaria y estado nutricional. El peso corporal se detectó el día 0 y el día 21 para cada rata a lo largo de los procedimientos experimentales.

7.2. Prueba de Campo Abierto (OFT). La actividad locomotriz de cada rata se detectó a través de campo abierto prueba (OFT) como iluminado por estudios previos [29-39]. El aparato de campo abierto consistía en un cuadrado de 80 cm x 80 cm x 40 cm con pared negra y base negra, de la que la base se dividió en cuadrados iguales de 16 × 16 cm con líneas blancas legibles. Cada rata se colocó suavemente en el centro del suelo de campo abierto y luego se permitió disfrutar de movimiento independiente y explorar libremente durante 5 minutos. Los números cuadrados de rastreo (números de cruzar los sectores horizontales incluyendo tres patas en el mismo cuadrado) y tiempos de reposo (números de erección incluyendo cría) fueron monitoreados y registrados como un índice de actividad locomotriz y comportamiento exploratorio. Después de cada ensayo, se usó alcohol etílico al 75% para refrescar el aparato de campo abierto, lo que podría deshacerse de la interferencia de las señales de olor. OFT se llevó a cabo el día 0 y el día 21.

7.3. Prueba de Preferencia de Sacarosa (SPT). Refiriéndose a las investigaciones de estudios recientes [29-33], la sacarosa preferencia prueba (SPT) se empleó para evaluar la condición de anhedonic-like

Comportamientos de ratas. Las ratas fueron entrenadas para adaptarse a solución de sacarosa al 1% (Amresco, EE.UU.) durante los ciclos de adaptación. Después de la adaptación, todas las ratas se privaron de alimento y agua durante 23 horas. A continuación, se alojaron en jaulas individuales y tuvieron acceso libre a dos botellas previamente pesadas que contenían 150 ml de solución de sacarosa (1% p / v) y 150 ml de agua pura durante 1 hora. Al final del ensayo, las botellas de solución de sacarosa al 1% y agua pura se repusieron y se registraron. El SPT se realizó el día 0 y el día 21. La anhedonia se expresó mediante un consumo reducido de sacarosa.

2.8. Western Blot.

Después del último procedimiento experimental, las ratas se sacrificaron y decapitaron. Los cerebros se retiraron rápidamente, y el hipocampo fue aislado y almacenado a -80 ° C para el siguiente proceso. Las muestras se homogeneizaron con tampón de lisis RIPA, que contenía 50 mM de Tris (pH 7,4), 150 mM de NaCl, 1% de NP-40, y 0,5% de Na desoxicloruro e inhibidor de la proteasa cóctel (o fosfatasa inhibidor cóctel de proteína fosforilada) para la proteína extracción. A continuación, el sobrenadante se recogió después de la centrifugación a 13.000 rpm a 4ºC durante 20 minutos. El contenido de proteína total se determinó usando el ensayo de ácido bicinconínico (BCA). Después de la determinación cuantitativa del contenido de proteína total, las proteínas de cada muestra se desnaturalizaron a 100ºC durante 5min y se fraccionaron mediante electroforesis en gel de poliacrilamida SDS al 10% (PAGE). Las proteínas de las muestras fueron electrotransferidas sobre membranas de difluoruro de polivinilideno con voltaje a 80 V durante 60 min. Las membranas se bloquearon con albúmina de suero de toro al 5% (BSA-) TBST durante 1h a temperatura ambiente.

La expresión de proteína se detectó posteriormente por incubación con anticuerpos primarios policlonales de conejo contra PKA-α (1: 2000; 5842s, Cell Signalling Technology, EE.UU.), p-CREB (1: 500; ser133-9198S, Cell Signalling Technology, EE.UU.), CREB (1: 500, ser133-4820S, Cell Signalling Technology, EE.UU.) y GAPDH (1: 1000; 2118s, Cell Signalling Technology, EE.UU.) a 4ºC durante la noche. Después de la incubación con el primario las membranas se incubaron con IgG conjugada con HRP de cabra (1: 2000, ZDR-5118, Zhongshan Jinqiao Biotechnology Co., Ltd, Beijing, China) a temperatura ambiente durante 60 minutos. Los anticuerpos unidos se visualizaron utilizando un reactivo de quimioluminiscencia mejorado mediante el kit ECL (RPN2232, GE Healthcare Life Sciences, Reino Unido) y se cuantificaron densitométricamente utilizando el sistema de análisis de imagen de gel (Gene Gnome, Syngene, EE.UU.). Los experimentos se realizaron por triplicado con muestras triplicadas. Se calculó el valor medio de densidad óptica de cada banda proteica con respecto a la banda de gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH) de la misma muestra.

2.9. Análisis estadístico.

Todos los datos fueron estadísticamente analizados por el software SPSS 22.0 (IBM, Armonk, NY, EE.UU.) y expresados como la media ± desviación estándar (x ± s). El consumo total de sacarosa, la ganancia de peso corporal y la expresión de PKA-α, CREB y p-CRE se analizaron mediante un análisis de varianza unidireccional (ANOVA). Las diferencias entre medias individuales fueron probadas para determinar la significancia utilizando la diferencia mínima significativa de Fisher (LSD) o el procedimiento T2 de Tamhane. Las puntuaciones de movimiento horizontal y vertical fueron analizadas por el Prueba de Kruskal-Wallis H. Los valores de probabilidad inferiores a 0,05 se consideraron muy significativos.

3.RESULTADOS:

3.1. La acupuntura alivia los comportamientos depresivos en las ratas depresivas inducidas por CUMS. Para investigar los efectos de la acupuntura en los comportamientos de tipo depresivo en el modelo de depresión de rata inducido por CUMS, se observaron el BW, el SPT y el OFT del experimento previo al post-experimentado. Los resultados mostraron que, en comparación con el grupo control, la ganancia en peso corporal fue significativa,  y la ingesta de sacarosa y los tiempos de movimientos horizontales y verticales fueron notablemente reducidos en el grupo modelo, todos con significación estadística (P < 001, P <001 y P <001) (Tablas 2 (a), 2 (b) y 2 (c), Figuras 2 (a), 2 (b), 2 (c) y 2 (d)). Sin embargo, la ganancia de peso corporal fue evidentemente aumentada, y la ingesta de sacarosa y los tiempos de movimiento horizontal y vertical fueron notablemente elevados en la Acu y FLX versus los del grupo modelo después del tratamiento con acupuntura y fluoxetina (Acu vs. modelo con significación estadística: P <0 05, P <0 05, P <0 05 y P <001) (FLX versus modelo con estadística Significancia: P <0 05, P <0 01, P <0 05 y P <0 01) (Cuadros 2 (a), 2 (b) y 2 (c) Figuras 2 (a), 2 (b) ), 2 (c), y 2 (d)). Tanto la acupuntura como la fluoxetina podrían aliviar los comportamientos de tipo depresivo inducidos por CUMS.

Además, para identificar los efectos subyacentes de la respuesta antidepresiva de la acupuntura a través de la vía PKA en ratas expuestas a CUMS empleando la vía de señalización PKA, el inhibidor H89 se realizó como inyección intracerebroventricular para inhibir específicamente la vía de señalización PKA. Como los resultados indicaron, en comparación con el grupo de control, la ganancia en el peso corporal se redujo significativamente en el pre-experimento de los grupos Acu + H89 y FLX + H89 (P <0 01; P <0 01), lo que podría ser debido a La anestesia durante la cirugía de cateterismo de ICV que altera el orden regular de la dieta. Después de 7 días de recuperación de la cirugía, la línea de base característica de los comportamientos de las ratas en el Acu + H89 y FLX + H89 grupos siguió el ritmo de los demás.

A continuación, se observó el BW, SPT y OFT de pre-experimento versus postexperimentación. Los resultados mostraron que, en comparación con el grupo de Acu, la ganancia de peso corporal y la ingesta de sacarosa se redujeron significativamente (P <0 01; P <0 01), y los tiempos de movimientos horizontales y verticales fueron notablemente reducidos en el Acu + H89, todos ellos con significación estadística (P <0 05 y P <0 01) (Tablas 2 (a), 2 (b) y 2 (c), Figuras 2 (a), 2 (b) 2 (c), y 2 (d)). Curiosamente, la diferencia entre FLX y FLX + H89 fue inconsistente con los resultados de Acu frente a Acu + H89. Los efectos antidepresivos de la acupuntura y la fluoxetina fueron inhibidos por el inhibidor de la PKA H89.

 3.2. ICV Evaluación del Cateterismo. Las ratas fueron sometidos a ICV cateterización (Figuras 3 (a) y 3 (b)), como se describe en estudios anteriores [35-37]. ICV inyección de 1% Evans azul en el paracele bilateral se realizó para verificar y garantizar la eficacia y la validez de ICV de H89 en ratas en los grupos Acu + H89 y FLX + H89. Los resultados mostraron que el paracele bilateral se impregnó de sustancia azul después de la inyección de ICV de azul Evans al 1% cuando se detectó a simple vista (Figura 3 (c)). Mientras tanto, la estructura y la morfología de paracele bilateral fueron investigados por secciones congeladas y examinados bajo el microscopio de fluorescencia. Se encontró que la pared de todo el paracele bilateral, incluyendo frontal, occipital, temporal y cuerno inferior, fue impregnado con azul Evans exhibiendo fluorescencia roja (Figura 3 (d)]. En consecuencia, la eficacia y la validez de la cateterización de ICV y la inyección de

ICV han sido notablemente evidenciadas por nuestro presente estudio.

3.3. El análisis de los efectos antidepresivos de la acupuntura en la vía de señalización PKA/CREB. Se ha demostrado que la vía de señalización de PKA está asociada con la patogénesis de los trastornos mentales, incluida la depresión. En el presente estudio, los niveles de expresión de PKA-α, CREB y p-CREB fueron detectados por análisis de transferencia de Western para investigar los mecanismos a través de los cuales la acupuntura mejora los comportamientos de tipo depresivo en ratas expuestas a CUMS. H89, el inhibidor de la PKA, se utilizó para explorar si la vía de señalización PKA estaba involucrada en los efectos antidepresivos de la acupuntura, que a su vez investigar los mecanismos subyacentes a la respuesta antidepresiva de la acupuntura a través de la vía de la señal PKA.

3.3.1. Nivel de expresión de PKA-α en el hipocampo. Los resultados mostraron que, en comparación con el grupo control, la expresión de PKA-α del hipocampo en el grupo modelo fue significativamente downregulated (P <0 01) (Tabla 3 y Figura 4]. Tras el tratamiento de la acupuntura y la fluoxetina, la expresión de la PKA-α hipocámpica en el grupo de acupuntura y en el grupo de la fluoxetina se incrementó significativamente en comparación con la del grupo modelo (P <0 01; P <0 05) Y Figura 4). Tanto la acupuntura como la fluoxetina podrían revertir la regulación negativa de la PKA-α hipocampal inducida por CUMS. No se encontró diferencia significativa entre los grupos de acupuntura y fluoxetina (P> 0 05). Del mismo modo, no se encontraron diferencias significativas Entre el grupo Acu frente al grupo Acu + H89 y el grupo FLX con el grupo FLX + H89 (P> 005; P> 005).

3.3.2. Nivel de expresión de CREB y p-CREB en el hipocampo. Además, se evaluaron las expresiones CREB y p-CREB del hipocampo. Los resultados mostraron que no hubo diferencias significativas entre el grupo control, el grupo modelo, el grupo Acu, el grupo FLX, el grupo Acu + H89 y el grupo FLX + H89. Sin embargo, el nivel de expresión de p-CREB en el grupo de modelos disminuyó notablemente comparado con el del grupo de control (P <0 01) (Tabla 3 y Figura 4). Del mismo modo, la expresión de p-CREB fue notablemente downregulated entre Acu + H89 frente al grupo control y FLX + H89 frente al grupo control (P <001; P <001) (Tabla 3 y Figura 4). Por el contrario, el nivel de expresión p-CREB en el grupo de acupuntura fue significativamente upregulated en comparación con el grupo de modelos (P <0 01). Mientras que la expresión de p-CREB en el grupo de fluoxetina presentó una tendencia de escalada en comparación con el grupo de modelos (P> 0 05). No se encontró diferencia significativa entre los grupos de acupuntura y fluoxetina. La expresión de p-CREB fue notablemente downregulated entre el grupo de Acugroup versus Acu + H89 y el grupo FLX frente FLX + H89 grupo (Tabla 3 y Figura 4].

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DISCURSIÓN.

 El presente estudio tuvo como objetivo identificar los mecanismos moleculares y neurobiológicos responsables de la respuesta antidepresiva tras el tratamiento de la acupuntura. Se estableció un modelo de rata de trastorno depresivo inducido por CUMS. Para evaluar los comportamientos relevantes para la depresión, se incluyeron la prueba de campo abierto (OFT), el consumo de sacarosa y el peso corporal, incluyendo la capacidad de adaptación a nuevos ambientes, la sensibilidad a la estimulación y el placer de recompensa, o principalmente el estado de anhedonia. Nuestros hallazgos indicaron que se observó que las ratas sometidas a CUMS exhibían un apetito obviamente bajo y un aumento significativamente lento del peso corporal, la regresión adaptativa a nuevos ambientes, el estancamiento para recompensar la estimulación y el placer, o el cambio del estado de ánimo alterado de la durante todo el procedimiento CUMS. El resultado del presente estudio es consistente con el presente estudio que ilustra que la CUMS podría inducir conductas de tipo depresivo, imitando efectivamente los síntomas de depresión en los pacientes [40-41].

La acupuntura mostró efectos antidepresivos convincentes en la mejora de los comportamientos relacionados con la depresión. Es importante destacar que la PKA, el regulador CREB en sentido ascendente y la fosforilación de CREB en Ser133 por PKA, p-CREB, también mostraron un patrón de expresión dependiente de la tensión. A pesar de los niveles de expresión de PKA y p-CREB se upregulated después del tratamiento de la acupuntura y fluoxetina, la inhibición de PKA-CREB signo por H89 invertido la upregulation de p-CREB nivel de expresión (pero no PKA y CREB) y los efectos antidepresivos en la mejora de la depresión relacionados con comportamientos de acupuntura y fluoxetina, lo que sugiere que tanto la acupuntura y la fluoxetina podría lograr los efectos antidepresivos mediante la promoción de la fosforilación de CREB en Ser133 por PKA-CREB señalización. Otros estudios relativos a la señalización CREB han arrojado luz sobre los efectos potencialmente promotores de la neurogénesis implicada en los comportamientos cognitivos o la función de la plasticidad sináptica que participan en la antidepresión [42-44]. En el presente estudio, se encontró que los niveles de expresión reducidos de hipocampo PKA-α y p-CREB, inducida por CUMS, fueron invertidos por la acupuntura. Lo que es más, el nivel de expresión upregulated de p-CREB, pero no PKA y CREB, fue inhibido por H89, lo que indica que el aumento de la expresión p-CREB (fosforilación de CREB) podría ser en parte atribuible a la mayor activación de PKA. Aunque no se encontró diferencia significativa en la acupuntura frente a la fluoxetina, con respecto a la inhibición de la fosforilación de CREB (expresión de p-CREB) por el inhibidor H88 de PKA, es notable que los efectos antidepresivos de la acupuntura en aliviar el nivel de ingesta de sacarosa y las puntuaciones de movimiento horizontal más convincente que la fluoxetina después de la administración de H89. Todos estos resultados podrían indicar que la respuesta antidepresiva de la acupuntura no sólo depende de PKA/CREB señalización, que es idéntico a nuestros estudios anteriores [45].

La acupuntura, una de las terapias convencionales de la medicina tradicional china (MTC), contribuye a los efectos terapéuticos mediante la regulación de los sistemas nervioso, endocrino e inmunitario [45] y desempeña un papel importante en el mantenimiento del estado fisiológico normal del organismo. Basándose en la teoría básica de la MTC, la compatibilidad de los puntos de acupuntura juega un papel importante en la prescripción de la acupuntura, que a su vez está directamente implicada en el efecto terapéutico clínicamente. Durante nuestros estudios anteriores, los efectos subyacentes y los mecanismos de acupuntura en la depresión se han investigado [46-47]. Baihui (GV 20) y Yintang (GV 29) se consideran los módulos optimizados acupoint en el tratamiento de la depresión [46-47]. Según la teoría básica de la MTC, Baihui (GV 20) e Yintang (GV 29) son puntos de acupuntura pertenecientes al meridiano del gobernador, que tiene un contacto directo con el cerebro a través de canales y colaterales [48-49]. En consecuencia, la acupuntura en estos puntos de acupuntura puede regular el flujo de Qi y la sangre del meridianos gobernador, que a su vez regula la mentalidad y alivia la depresión [48-50]. Los datos de las investigaciones clínicas y los animales de laboratorio han proporcionado evidencia de que la acupuntura mostró eficacia antidepresiva similar a la depresión [47-51-52]. Nuestros estudios previos han investigado que la acupuntura en Baihui (GV 20) y Yintang (EX-HN 3) podría aliviar la depresión aumentando la expresión del neurotransmisor excitador en el hipocampo, atenuando la neurogénesis alterada e inhibiendo la apoptosis de las neuronas hipocampales [46-47].

El presente estudio ha demostrado que la activación de la fosforilación de CREB a través de la cepa dependiente de señalización PKA/CREB exhibe convincente efecto antidepresivo en respuesta a la acupuntura. Otros estudios se centrarán en la expresión del BDNF y el efector en sentido descendente de la señalización PKA/CREB y otras señalizaciones comúnmente responsables de las diferencias individuales en las respuestas antidepresivas entre los antidepresivos y la acupuntura, lo que aclarará los mecanismos subyacentes relacionados con la respuesta antidepresiva de la acupuntura y explorar nuevas perspectivas de la medicina integrada en el tratamiento de la depresión.

[1] H89 es un inhibidor de la Proteína quinasa A.

[2] Es evidente que los autores nos están hablando de la patogénesis biológica de la misma. Aquí la medicina oriental es muy prometedora, junto con la psiconeuroacupuntura nos describen y nos explican con su enfoque la causa y los mecanismos bio-energéticos subyacentes a esta patología o grupo heterogéneos de síntomas. Los modelos explicativos propios de la PNA y MOR pueden explicar a la perfección como sucede esto, (depresión) a través de la cibernética basada en el wuxing y las teorías alostáticas basadas en yinyang. Muy de cerca de este pensamiento tenemos a la Psiconeuroendocrinoinmunología que sin duda nos brindara en un futuro no muy lejano más bases científicas a la acupuntura científica.

[3] La inflamación crónica esta detrás de muchísimas patologías actuales, de hecho podemos afirmar que actúa como factor epigenético en multitud de enfermedades. Sobre la inflamación crónica y su relación con el sistema inmunológico y la depresión hablo extendidamente en mi libro: Inmunología y Psiconeuroacupuntura. Hoy en día la depresión se esta relacionado muy directamente con la inflamación crónica. En este libro relaciono de forma científica la inflamación crónica con las insuficiencias de yin, sobre todo de la fase Agua.

[4] Observamos como la PKA esta relaciona con la fase agua, pues interviene en la neuroplasticidad y memoria. Este estudio como más adelante justificare es interesantísimo por que nos señala que marcadores somáticos son los más  adecuados para estimular.

[i] Copyright © 2017 Huili Jiang et al. Se trata de un artículo de acceso abierto distribuido bajo la Licencia de Atribución de Creative Commons, que permite el uso, distribución y reproducción sin restricciones en cualquier medio, siempre y cuando la obra original esté debidamente citada.

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4 Comentarios

  1. Mirna Montesano

    Excelente trabajo Dr. Juan pablo, lo leo desde México. muchas gracias por compartirlo!

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    • Juan Pablo Moltó

      Un placer saberlo y su comentario.

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  2. ELIZABETH BAEZ

    MUCHA GRACIAS, ME ENCANTO. HAY UN PEQUENO ERROR TIPOGRAFICO EN EL PUNTO A TRATAR ( Baihui (GV 20)) BAIHUI 20 DU. ES MUY CLARO QUE ES SOLO UN ERROR TIPOGRAFICO . MUCHAS GRACIAS POR SU TRABAJO.

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    • Juan Pablo Moltó

      Hola!!! Mil gracias por su aportación… Un abrazo enorme!

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